LONZA 4D-Nucleofector LV单元，即LV大体积转染模块，是LONZA 4D-Nucleofector 细胞核转染系统中的一员。作为不依赖于细胞分裂的非病毒转染，Nucleofector核转染技术，结合传统的电转染技术和细胞特异性电转染液（根据细胞种类优化），通过核转染仪内置的电转程序（根据细胞种类优化），可将质粒DNA、DNA单链、mRNA或siRNA等，转入原代细胞或细胞系的细胞质中，实现瞬时转染，或直接进入细胞核，实现稳定转染。（阅读前文了解4D-Nucleofector核转系统）
LONZA 4D-Nucleofector LV大体积转染模块，可直接使用已在X模块上验证的转染条件，实现封闭、大规模的细胞连续转染，细胞数量可达1*10^7至1*10^9。
LV模块提供2种转染方式：
1、1mL电转盘：通过手动灌注，一次可转染1*10^7至1*10^8数量细胞；
2、20x1mL电转盘：通过导管连接储液罐或储液袋灌注，每次进样1mL，连续自动处理20mL，一批可快速转染1*10^9数量细胞。
Nucleofector核转技术具有转染效率高、重复性好、转染后细胞活性高、转染后细胞功能良好的特点，针对GMP流程可提供GMP标准的转染试剂盒（预计2019年底或明年初上市）、系统软件符合21CFR part11要求、可提供CoO、CoA质控文件、IQOQ文档等。其多种转染模块，可满足转染细胞数量和通量的不同需求，适用于免疫治疗研究的各个阶段：
1、研发阶段：
内容：鉴定药物靶标，方法验证，应用设置
需求：高效的免疫细胞转染
适用：X模块
2、临床前阶段：
内容：动物或细胞实验，疗效、毒性、药物代谢动力学数据，工艺开发
需求：规模化，标准化
适用：X模块或LV模块
3、临床阶段：
内容：临床研究，小规模生产
需求：规模化，质量控制
适用：LV模块
4、商业化阶段：
内容：商业化应用，大规模生产
需求：生产质量，质控
适用：LV模块
LONZA Nucleofector 核转染技术目前常用于人原代T细胞转染，由于其与CRISPR和其他基因组编辑技术的实用性，成为基因治疗的理想研究工具。
人T细胞转染结果：用pmaxGFP载体质粒转染人PBMCs细胞，CD3阳性T细胞染色和检测。
人T细胞中CRISPR结果：用Cas9/gRNA核糖核蛋白核转染预刺激人T细胞。
人T细胞ZFN mRNA转染结果：分别用少量(100μL)和大量（1mL）的GFP mRNA或ZFN mRNA转染人T细胞，在转染后不同的时间节点对细胞进行分析。
参考文献：
1、使用LONZA 4D-Nucleofector X单元
Engineering of CRISPR-Cas12b for human genome editing.(用于人类基因组编辑的CRISPR-Cas12b) Strecker J, et al.Nat Commun. 2019 Jan 22;10(1):212. doi: 10.1038/s41467-018-08224-4. Cell used in:T cell,human
研究者团队着重关注第三种II型蛋白效应核酸酶：Cas12b，然而Cas 12b在48℃时表现出最佳的DNA切割活性，而在37℃时野生型BhCas12b会优先切割no-target DNA，导致编辑效率降低。研究者通过结合多种方法使BhCas12b的功能获得突变，从而克服了这一限制。并且在细胞系和人原代T细胞中获得了很好的编辑效率，与Cas9相比具有更高的特异性。
Gene correction for SCID-X1 in long-term hematopoietic stem cells.(Nat Commun. 2019 Apr 26;10(1):2021. doi: 10.1038/s41467-019-10080-9. Cell used in: CD34+ cell,human)
Orthotopic replacement of T-cell receptor a- and ?-chains with preservation of near-physiological T-cell function.(Nat Biomed Eng. 2019 Jun 10. doi: 10.1038/s41551-019-0409-0. Cell used in: T cell,human)
Bacteria-free minicircle DNA system to generate integration-free CAR-T cells.(J Med Genet. 2019 Jan;56(1):10-17. doi: 10.1136/jmedgenet-2018-105405. Cell used in: K562,T cell,CD34+ cell,ES,human)
Single-Step, High-Efficiency CRISPR-Cas9 Genome Editing in Primary Human Disease-Derived Fibroblasts.(CRISPR J. 2019 Feb;2:31-40. doi: 10.1089/crispr.2018.0047. Cell used in: Fibroblast, CD4+ T cell,human)
Ribonucleoprotein Transfection for CRISPR/Cas9-Mediated Gene Knockout in Primary T Cells.(Curr Protoc Immunol. 2019 Feb;124(1):e69. doi: 10.1002/cpim.69. Cell used in: T cell,human and mouse)
2、使用LONZA 4D-Nucleofector LV单元
Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer.(JCI Insight. 2018 Apr 19;3(8). pii: 99263. doi: 10.1172/jci.insight.99263. Cell used in:BM derived-MSC-derived exosomes)
CRISPR/Cas9 ?-globin gene targeting in human haematopoietic stem cells.(Nature. 2016,539(7629): 384-389. Cell used in: CD34+ cell,human)
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