需要用到snapgene软件进行设计。
1.打开目的基因CDS的fasta文件(snapgene);
2.点击上方工具栏中的action-Gateway cloning-BP cloning;
打开Gateway cloning设计引物
3.全选序列(ctrl+A即可),点击上方Donor Vector;
4.在右方选择克隆载体(pDONR221);
5.点击上方Entry clone,choose primers-选择Tm(60°)-即可得到primers;
6.点击primer即可得到引物。
得到attB引物













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