食管癌（Esophageal cancer，EC）是我国常见的消化道肿瘤，口腔摄入习惯对EC的发生发展有很大的影响。近日，凌恩客户南京中医药大学研究人员于2022年最新发表在《Journal of Cancer》的研究论文“Influence of Oral Intaking Habit on Tongue Coating Microbiota in Patients with Esophageal Precancerous Lesions”中探讨了食管癌前病变（esophageal precancerous lesions，EPL）患者口腔摄入习惯与舌苔（tongue coating，TC）微生物群落的相关性，为口腔摄入习惯对EPL口腔微生物改变的影响提供了合理的解释。
发表期刊：Journal of Cancer（IF=4.207）
发表时间：2022
合作单位：南京中医药大学
样本类型：口腔样本
实验设计
1、研究对象
123例食管癌前病变（EPL）患者和176例轻度食管炎志愿者作为对照研究。
2、研究方法
16S rRNA的V3-V4区域的高通量测序，分析了舌苔（TC）微生物群。同时收集患者信息，并测定胃内幽门螺杆菌（Hp）的感染状态以及血清总胆汁酸（TBA）和白细胞介素-17α（IL-17α）的水平。
主要结果
1、研究对象特征和多样性分析
两组研究对象样本在年龄、体重指数、性别等方面无显著差异（P > 0.05）。病例组和对照组之间的Alpha多样性没有显著差异（P > 0.05）（表1）。
表1 EPL病例组和对照组的alpha多样性
2、TC微生物群落结构
TC样本中5,190个OUTs被注释到了11个门，19个纲，44个目，86个科，191个属（图1a）。优势门包括拟杆菌门、硬壁菌门、变形菌门等（图1a）。优势属包括有Prevotella 7、奈瑟氏菌属、梭形杆菌属等。
图1 TC微生物群在门水平和属水平的群落结构
3、EPL患者TC样本中的差异物种
对EPL患者舌苔菌群进行LEfSe差异分析表明，病例组中[Eubacterium] yurii group，Peptostreptococcus和Capnocytophaga的相对丰度显著高于对照组（P < 0.05）（图2b、2c和2d），这可能是TC样本中EPL病例组的潜在差异物种。
图2 EPL病例组差异物种分析
4、TC微生物群落共生网络
微生物群落共生网络表明，对照组中有39个正相关和32个负相关（图3a），病例组中有29个正相关和23个负相关（图3b）。消化链球菌属与Parvimonas/Prevotella 2呈显著正相关，但在病例组中相关性较弱。这些结果表明，EPL的发生削弱了TC微生物群的共生网络，降低了共生的复杂性。
图3 TC微生物群落的共生网络
5、口服摄入习惯对TC菌群的影响
采用LEfSe分析对不同口腔摄入习惯（吸烟、饮酒和喝茶）下TC微生物群的差异物种进行测定，结果表明与EPL相关的微生物群结构组成受到口服摄入习惯（特别是吸烟）的强烈影响。
图4 LEfSe分析显示了在某些具有特定口服摄入习惯的病例和对照人群中，TC微生物群的biomarkers。
6、口服摄入习惯与TC菌群的相关性
Spearman相关分析结果表明，有6个属与吸烟呈显著正相关，有3个属与吸烟呈显著负相关（P < 0.05）。Mann-WhitneyU检验结果显示，病例组与对照组之间的口服摄入习惯无显著性差异（P > 0.05）（图5b）。在病例组和对照组中，奇异菌属和放线菌属与口服摄入习惯得分呈显著正相关（P < 0.05）（图5c）。
图5 TC微生物、口服摄入习惯和EPL之间的相关性
7、TC菌群预测功能的不同分析
LDA结果表明，对于日常吸烟者，氨基糖和核苷酸糖代谢等14个功能在对照组富集，分泌系统、卟啉和叶绿素代谢等16个功能在病例组富集（图6a）。对于日常喝茶的人，半胱氨酸和蛋氨酸的代谢等功能在对照组被富集，而丁酸代谢在病例组中得到了丰富（图6b）。
图6 基于TC微生物对特定口腔摄入习惯人群的预测功能的LDA分析。a，每天吸烟；b，每天喝茶；c，从不喝茶
8、TC菌群预测功能的验证
EPL患者和对照组之间的血清TBA和IL-17α水平没有显著差异（P > 0.05）（图7a和7b）。饮酒和Hp感染显著影响血清TBA含量（图7c-d）。Spearman相关分析显示，TC拟普雷沃氏菌属与血清TBA浓度呈正相关，与IL-17α浓度呈负相关。TC罗氏菌属与血清TBA和IL-17α水平均呈正相关（图7e）。
图7 TC微生物群预测功能的验证。
对照组与病例间血清TBA（a）和IL-17α（b）的差异分析；（c）从不饮酒和每天饮酒的血清TBA有显著差异；HP阴性和HP阳性对照组（d）之间的血清TBA有显著性差异；优势TC菌与血清TBA、IL-17α进行相关分析（e）。
总结
综上所述，食管癌前病变（EPL）的发生改变了患者舌苔微生物群结构，降低了舌苔微生物群的共生复杂性，这也受到与癌症相关的口腔摄入习惯（吸烟、饮酒等）的影响。此外，胆汁酸（TBA）可能是介导舌苔微生物群变化的关键因素。
参考文献
Influence of Oral Intaking Habit on Tongue Coating Microbiota in Patients with Esophageal Precancerous Lesions. Journal of Cancer, 2022.
DOI:10.7150/jca.67068
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