DNA 样品的酚抽提

酚抽提通常用来对DNA 或RNA 样品进行蛋白质的去除。酚与水不互溶，当它们混合时会形成两相，水相和酚相。当含有DNA 的水溶液与酚混合时，蛋白质会进入酚相，再将含DNA 的水相取出进行再抽提和乙醇沉淀浓缩。

一、材料

抗有机溶剂的塑料管，尝试尽可能小的体积，大多数的抽提可以在微量离心管中进行。

TE 饱和的酚：氯仿：异戊醇(25 : 24:1)

氯仿：异戊醇(24 : 1)

移液器和移液头

二、步骤

DNA样品中加入等体积的TE饱和的酚氯仿，对于1.5 ml 的微量离心管，总体积不应超过500 μI 。

剧烈振荡20 s 。

样品在室温离心5 min, 分相，这个步骤不需要很高的转速，但是通常用最高转速比较方便。小心地从离心机中取出样品，不要搅动分开的两相

在不搅动蛋白质层的情况下，用移液器小心地将尽量多的水相转移到新的离心管中。

向水相中加入等体积的氯仿，重复步骤2 、3 和4 。

做好标签，现在就准备用乙醇沉淀浓缩

为了提高产量：如果觉得没有得到足够的水相，可以在酚相加入与酚相等体积的pH 7.5 的TE, 对酚相再次抽提、振荡、离心。如果两次抽提的体积小于500 μl, 可以将它们合并，但是最后你会发现在这个管子里几乎没有DNA。一般对酚相进行常规的酚抽提是不值得的。

为了提高纯度：如果你觉得可能已经混入了蛋白质层，那么可以加入与水相等体积的酚氯仿再次抽提水相、振荡、离心。如果发现DNA 的酶反应不能正常进行，那么DNA 样品必须进行2 次抽提。