酿酒酵母的培养和保存

酵母是一个极具研究价值的模式生物：细胞周期调控、端粒酶活性和自噬均在酿酒酵母中被发现。
同时，酵母易于培养且其载体和株系都已商品化，成本相对低廉。
这里介绍：在实验室如何 培养酵母 和 保存株系。

1. 酵母计量方式（OD600值）

OD600值（光密度或吸光度）：光通过酵母细胞悬浮液，前后强度比值的对数值（使用分光光度计可以测定特定波长下的光密度）

评估溶液中的酵母浓度

酵母生长曲线绘制：

酵母生长曲线

• 缓慢期（lag phase）：细胞适应环境，生长变大但并不分裂
• 指数增长期（bog phase）：细胞分裂旺盛，细胞数目开始倍增
• 稳定期（stationary phase）：营养耗尽，进入稳定期，细胞数目保持恒定

计算倍增时间（doubling time）: 细胞数目加倍所需要的时间，根据它安排一整天的实验进程。

计算倍增时间
举例：野生型酵母倍增时间85min

2. 酵母培养基配制

酵母培养基配制

• 酵母提取物（Yeast Extract）：去除细胞壁的酵母细胞成分，提供氨基酸、维生素、碳水化合物和其他生长所需营养
• 蛋白胨（Peptone）：来源于动物肉类或乳类，是酵母培养基的主要氨基酸来源
• 糖分（Sugar）：通常指葡萄糖，为细胞生长提供能量

2.1 培养板法

将蛋白胨和酵母提取物搭配好之后（如果做固体培养基需要加琼脂），高压灭菌锅灭菌，固体培养基可以用来划线酵母，获得单克隆。
平板画好线之后，翻转放置，30摄氏度培养

酵母培养

后续可以接种单克隆菌落，放到液体培养基中混匀，30摄氏度摇床培养48h。

2.2 培养液法（大规模培养酵母）

用分光光度计测量培养48h的酵母培养物在600nm的OD值，稀释起始OD值在 0.1-0.2，然后分装到多个小瓶子，放到30摄氏度摇床，培养到想要的OD值。

3. 储存酵母

• 平板培养酵母：4摄氏度；保存长达3个月（需要新鲜酵母时，在新的平板上接种酵母，重新画线获得单克隆）
• 分装细胞到含甘油的冻存管：-80摄氏度；保存长达几年

postscript: 研究应用

• 稳定期的细胞：可以用于研究衰老过程中，调节基因组DNA不稳定性的基因
• 指数增长期的细胞：此时的酵母健康正常，可用于研究真核细胞器，如核糖体

参考视频链接：https://www.bilibili.com/video/BV1kx41157m9?p=1&share_medium=android&share_plat=android&share_session_id=ad9fc7cf-5335-48a5-b1b6-2a1d8a39e38a&share_source=WEIXIN&share_tag=s_i&timestamp=1646030473&unique_k=zMQgF3i