昆虫血淋巴收集方法

参考资料

王岩, 马纪, 刘小宁. 昆虫血淋巴的收集技术与方法[J]. 应用昆虫学报, 2009, 46(001):147-151.
在列举的2.2 离心法提取血淋巴板块，内容为

“Xu 等[6] 采用双管离心法。操作方法是:在0.5 mL 的锥形离心管底部用针扎数个小孔, 放入破开了腹壁的昆虫, 将其插入到1.5 mL 微量离心管中, 离心后从1.5 mL 离心管底收集血淋巴。”

然后下载Xu文献，其关于离心的操作描述如下：
Xu W Y , Huang F S , Hao H X , et al. Two serine proteases from Anopheles dirus haemocytes exhibit changes in transcript abundance after infection of an incompatible rodent malaria parasite, Plasmodium yoelii[J]. Veterinary Parasitology, 2006, 139(1):93-101.

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其中关于离心法收集的步骤，修改自Sidjanski ，因此进一步，下载了
Sidjanski S., Mathews G. V. and Vanderberg J. P. (1997). Electrophoretic separation and identification of phenoloxidases in hemolymph and midgut of adult Anopheles stephensi. Journal of Parasitology, 83 (4), 686-691.

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也是参考其导师文章，
Vanderberg M J P . Hemolymph of Anopheles stephensi from noninfected and Plasmodium berghei-infected mosquitoes. 1. Collection procedure and physical characteristics.[J]. Journal of Parasitology, 1978, 64(5):918-923.

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所以双管离心法的标准步骤如下：

1. 在昆虫腹部或其他地方制造创伤性伤口
2. 在4℃，375g离心10min（离心力的大小需要根据不同物种进行测试，标准是不使其嗉囊和肠道内液体流出为好，避免饮食污染）
3. 取出0.5ml离心管后，再高速离心10min沉淀血细胞；
4. 吸取上清至新的离心管中。
5. BCA法测定血清总蛋白含量用作归一化（或者参考说明书以血液浓度计算即可）