入职以来遇到的尚未攻克的难题之一是磷酸化的抗体在组织样品里一直跑不出阳性信号。
最开始考虑可能是抗体比例问题，便由说明书建议的1：1000的稀释比例逐步增加到了1：50，始终只有杂带。联系厂家的技术人员，建议排除一下是不是是在组织中的表达太低所以看不到阳性信号，因此一方面根据厂家提供的protocol优化实验流程，另一方面液单独培养了一波细胞进行取样。事实证明，真的是组织样本的问题。
由于磷酸化的蛋白比较容易降解，因此首先考虑是否是在组织样本制作的过程中存在导致其降解的因素。将细胞样品的制备过程与之进行对比，可以优化的最可能的点是匀浆这一步。
组内讨论之后决定拿纯手工的玻璃研磨器同平时常用的电动匀浆仪进行一下比较。以排除电动匀浆仪匀浆过程中的产热问题对样品的影响。
根据师姐既往的经验，预先配制每个样品500ul RIPA混合物 (RIPA裂解液+1000X PMFS+100xPI+100X磷酸酶抑制剂）。先加入组织研磨后，加入200ul RIPA混合物，沿着玻璃柱加入，最后用200ul清洗一遍玻璃柱，避免产生过多气泡；另一方面用作对比的电动匀浆仪组每个样品准备200ul RIPA混合物。
开始操作的时候，本想着加了液体以后再研磨一下会比还没加RIPA混合液的效果更好，顺带还能清洗下管壁，可结果是，由于研磨管内空间很小，液体是进去了，到研磨过程中空气也跑了进去，导致整个管子里全都充满了气泡。直到此时才理解了师姐protocol里暗藏的玄机。
整个步骤听上去挺简单，而真正动手操作的时候，就变成脑子听懂了手却跟不上，还雄心勃勃想对步骤进行改良。避免产生过多气泡，真的应该避免。果然，不听老人言，吃亏在眼前。
被称笑作"MD"的实验耗材
科研欢乐的实验生活还在继续，要加油，争取早日攻关成功~
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