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Far-Western Blot分析

Far-Western Blot分析

作者: c674838bdc26 | 来源:发表于2021-09-26 09:46 被阅读0次

Far-Western Blot是一种基于Western Blot技术的分子生物学方法,可用于检测体外蛋白质与蛋白质的相互作用,尤其是不需要目标蛋白质的天然结构的相互作用检测。

Far-Western Blot技术的整体工作流程与Western Blot相似,只是Western Blot中探测目标蛋白质需要抗体,而Far-Western Blot分析中不需要抗体,而是使用经过纯化和标记的“诱饵”蛋白来探测和检测膜上的目标蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中,蛋白质都是通过SDS凝胶和native PAGE凝胶对样品进行分离,然后将蛋白质从凝胶转移到膜上。转模后,用BSA进行封闭。在膜上对蛋白质进行变性和复性,及后续的检测步骤。Far-Western Blot技术用商业化的高度纯化的诱饵蛋白将膜标记上探针。在诱饵蛋白与目标蛋白反应后,根据所使用的诱饵蛋白,可以检测到与该目标蛋白相对应的条带。

为了鉴定与给定蛋白相互作用的蛋白,Far-Western Blot是一个实验成本低、灵敏度高的有效平台。远western blotting的原理是对western blotting的改进,以自然折叠的重组蛋白作为第一个探针,与转染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二个探针是针对给定蛋白的特异性抗体,而酶标的第三个探针是针对第二个探针的抗体。当与LC-MS-MS蛋白鉴定相结合时,可以对得到的蛋白斑点(或蛋白条带)进行表征,然后进行进一步的功能分析,如蛋白免疫沉淀等。

Far-Western Blot分析时,当需要保留蛋白质的天然构象和天然相互作用时需要注意以下问题:1)变性条件下在SDS凝胶中分离的蛋白质可能会发生变性,而变性蛋白可能不会与诱饵蛋白发生反应,从而导致无法识别出相互作用。2)在结合之前将蛋白质变性并复性,也可能导致蛋白质发生构象变化,从而影响靶蛋白与诱饵蛋白的结合。3)如果结合位点受其它因素影响,失去与诱饵蛋白的结合能力,使诱饵蛋白无法与之反应,也可能导致相互作用检测失败。更棘手的是,以非天然构象呈现的蛋白质可能以新的非天然方式发生相互作用,导致检测假阳性。

百泰派克生物科技提供Far-Western Blot分析服务,可以根据您的需求定制实验,并对可能影响结果的潜在因素进行评估。我们承诺给出的数据可靠,且可重复性高。

Far-Western Blot分析

Far-Western Blot分析的优势

•可用于体外蛋白质相互作用研究

•分析蛋白的结合域

•比较蛋白质结合的亲和力

•无需特异性抗体

Far-Western Blot分析的工作流程

1.定量蛋白质,并通过SDS或native PAGE分离

2.将蛋白质从凝胶转移到膜上

3.将蛋白质进行变性和复性,以保证膜上的蛋白质结合位点充分暴露

4. BSA缓冲液对膜进行封闭

5.将膜与纯化的诱饵蛋白进行孵育

6.检测诱饵蛋白信号

7.图像分析及报告交付

How to order?

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百泰派克生物科技检测平台包括:检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室,以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业,以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系,协助客户发表了多篇中英文文章,包括Cell等多家高水平期刊。

公司自主检测平台发展至今,已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台,积累了丰富的实践经验,凭借专业的技术和优质的服务水平,客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校,也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质(组)研究技术包裹,助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破,为生命科学的发展做出贡献。

百泰派克技术平台

检测分析平台:多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱,NMR。

蛋白质组分析平台:Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM;蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。

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