CD3 T 细胞 磁珠分离T细胞的方法
书接上文（PBMC分离）以CD3T细胞为例
实验试剂：
- 美天旎的CD3beads（130-050-101）为例
- Buffer：
实验步骤：
2 磁珠孵育
- 细胞计数
- 淋巴细胞离心，300g×10min，去除上清
- 每10的7次方细胞，用80 uL buffer重悬
- 每10的7次方细胞，用20ul CD3磁珠混匀。
- 重悬混匀后，4℃冰箱避光孵育15min（如果是冰上，需要增加孵育时间；如果是常温，会增加非特异结合）
- 每10的7次方，加入1 mL Buffer洗涤，300g 离心 10min，弃上清
- 用500ul Buffer重悬细胞
3. 磁珠分选
LS （分选细胞多）
MS（分选细胞少）
image.png
- 将分离柱放置磁铁中央
- 将分离柱中加入3mL buffer，充分湿润分离柱
- 将细胞悬液加到分离柱中
- 结合磁珠的细胞会被吸附到分离柱上，没有结合的细胞会顺着液体留下来。加入3mL的buffer，待液体全部流尽，再加入3mL，一共洗3次。
- 将分离柱从磁铁上拿下
-
加5mL的buffer加到分离柱中，迅速用塞子推下，留下的液体中含有目的细胞
image.png
参考资料
网友评论