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使用IGV根据引物确定PCR产物序列位置

使用IGV根据引物确定PCR产物序列位置

作者: 玩转ATGC | 来源:发表于2021-11-12 16:22 被阅读0次

IGV是一个十分常用且好用的可视化基因组NGS测序信息的软件包,很厉害的一软件,不仅可以windows可视化操作,还可以写代码获取自动截图等,软件官网:http://www.igv.org/

IGV经常用于NGS测序数据的可视化,导入比对生成的Bam文件,即可查看到你想要位置的序列比对信息(后续可以详细介绍一下IGV的使用),示例如下:

NGS测序数据Bam文件IGV可视化

回归主题,那么如何使用IGV根据引物序列确定PCR产物序列以及所在基因组的位置呢,当然这个和上一篇文章所用In-Silico PCR工具一样只能手动少量操作,很难处理大量数据,也可用来对其他方式获得的结果进行确认:

这时就要使用到IGV的Tools目录的Find Motif..命令(参考基因组的话根据需要选择即可):

IGV Find Motif工具

将你的两个前后两个引物序列分别输入到上图的Search Pattern下的输入框中,然后点击OK即可:

这里还使用上一篇文章中的引物序列:

Gene:HS3ST2

PCR product size:140bp

Primer-1:ATAATTTCCAGAAAG

Primer-2:AGCATGAGAAAGAGGGACA

打开IGV,首先输入基因HS3ST2,并点击GO,就到了该基因所在位置,

然后再使用Tools目录下的Find Motif..命令分别输入前后两个引物序列,引物序列较短,需要不断调节IGV的标尺(右上角+号)达到合适的大小,最后结果如下:

IGV查找结果

验证结果与上一篇文章两个方法完全一致!相当于对上述两个结果进行了验证,哪个方法你感觉方便用哪个就好了!

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