昆虫基因编辑实验流程

作者: 谢俊飞 | 来源:发表于2023-05-10 13:42 被阅读0次

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昆虫基因编辑实验流程：

sgRNA设计
通过知名网站提供的工具进行序列分析，给出最佳的sgRNA候选，但是我编辑的序列较为短，没有选择余地，所以在所有的NGG位点都制备sgRNA，然后进行后续操作。
体外活性检验
这是最能评估sgRNA优劣的标准，虽然体外并不一定等同体内实验，但是是最为可行的有效办法。
活体预实验：
筛选活性最高的sgRNA进行胚胎注射实验。
存活个体长至3龄，然后提取DNA，进行突变检测。确认活体内有效的sgRNA。
正式胚胎注射：
将活体有效的sgRNA进行胚胎注射，然后进行突变监测和传代培养。

在以往的认知内，体外切割效果好的，在体内也应当具有很高活性，而事实并非如此，所以步骤3必须进行。因为持续饲养传代，至少2个月时间，否则极其浪费时间和精力，最后可能是徒劳。

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